雉辣椒属灵芝属，其根，茎和果实可用作药物。可以消除寒冷，消除气，减轻疼痛。植物主要含有生物碱，尤其是阿扑吗啡生物碱，以及少量的类黄酮，木脂素和其他成分。关药理研究表明，辣椒shantake曾在心血管治疗效果好，抗肿瘤，抗炎，提高免疫力，抗过敏，抗过敏，抗氧化，抗菌和杀虫剂。文对雉辣椒的化学成分和药理活性进行了详尽的总结，为该药用植物的详尽研究和应用提供参考。鸡椒;化学成分;药理活性;回顾[收到日期] 2013-11-21 [项目]国家自然科学基金（项目）;由教育部（2013年7月）[通讯作者] *柴星云湖，副研究员，研究药物在药品民族的成效给予募集资金项目，电话/传真：（010）电子邮件：xingyunchai@yeah.net; *您鹏飞，教授，从事研究和活性成分与中国传统医学的新药，电话的发展：（010）电子邮件：pengfeitu@vip.163.com木材种类樟山苍子竹杉（阴沉）个人，也被称为侧柏，山苍子，木材，木本，野生辣椒，芳香粉，山气味，接地棒姜有气味的香味[1]是多年生的雌雄异株的树木或灌木，有黄绿色的树皮，光滑而古老。子交替，芳香，两侧无毛。形花序，小花，淡黄白色。实几乎呈球形，幼时为绿色，烹饪时为黑色。2]雉辣椒适应性强，生长迅速，广泛分布于东亚，大洋洲，太平洋，印度，马来西亚，印度尼西亚等岛屿。国山鸡椒资源丰富，主要分布在长江，广西，广东，福建，江苏，
香樟浙江，湖南，云南，贵州，四川等省[南2]。前，在福建，湖南和四川人工创造了雉类森林[3]。鸡是热的，辛辣的和微苦的。种水果被用作药物，称为“诸城茄子”，可用于消除感冒和缓解疼痛。用于胃部感冒和呕吐，寒冷，腹部和冷痛的腹痛，寒冷和湿度的停滞和尿浑浊[4]。和根茎被用作药物，受飓风被称为“姜豆奶粉”用除湿，减轻心脏和胃，腹部疼痛行气止痛，发热，腹痛的影响，呕吐和腹泻，脚癣，水肿孕妇，风湿痛，瘀伤和脑血栓。1，5]。鲜的鱿鱼，粉碎和吞噬辣椒可以治疗的疾病，如腹胀，
香樟寒冷腹痛，恶心，呕吐，肠痰，中暑和支气管哮喘;从外面压碎的新鲜水果，可以治疗无名的肿胀，疼痛和皮肤病。外，野鸡辣椒果实也用于食品香料中，添加到各种腌制食品中，其特殊的风味可以抑制好氧菌的生长[6]。前对雉辣椒进化的研究已经部分总结[7-10]，但系统地总结了化学成分和药理活性。文重点介绍的化学成分和雉鸡的药理活性，包括根，茎，树皮和果实，提供医药研发和这种植物的应用提供参考。究化学组成到目前为止，65种化合物进行分离和在野鸡和结构类型识别类似于属灵芝[11]的其它植物，主要生物碱，生物碱尤其阿扑吗啡，少量。黄酮，木脂素，脂肪酸，类固醇等（表1，图1）。时，作为芳香药用植物，野鸡胡椒含有丰富的挥发油。
多研究人员表示，GC-MS有超过75种挥发油成分，主要是单萜和倍半萜。
究表明，野鸡的根，茎，叶，花和果实中挥发油的主要成分是非常不同的[10]。物碱尽管该研究的化学成分和目的与检测方法有关，但根据报道的数据，生物碱是植物的必需元素。目前为止，已经分离并鉴定了36种异喹啉生物碱（1至36）。据结构类型的分析，绝大多数是阿扑吗啡的生物碱，包括有机盐和高氯酸（表1，图1）[12-20]。此，阿扑吗啡的生物碱是野鸡的主要成分和特征成分。些生物碱的活性明显，引起了研究者的广泛关注。如，化合物20，23和24具有活性抗金黄色葡萄球菌和抗真菌链格孢和烟草尾孢，和25和26具有对六种肿瘤细胞系[12]显著的细胞毒性。合物36抑制血小板聚集和血栓素B2形成，表明其抗血栓形成活性[13]。合物2和19具有抗菌活性，19具有抗S活性。要的金黄色葡萄球菌等[14]。理活性的结果为野鸡辣椒的许多传统药用，食品调味料和防腐剂提供了科学依据。外，七种酰胺生物碱（37-43）中已经报道了这种植物，包括N-反式从根中分离阿魏酰-3- methoxytyramine（37）[15，21]，N阿魏酰顺式-3- methoxytyramine（38）[15] N-反式酪胺香豆（39），N-反式阿魏酰酪胺（40）[21-22]中，pheasantamine A（41）[22]和酰胺42 [23]和43 [ 21]从野鸡胡椒分支隔离。
1的化合物分离和胡椒野鸡鉴定（1〜65）表1化学成分1-65从山苍子分离下面的表1 PCR在冰上进行的10的反应系统中的实时μL含有5μlPCRPowerSYBR®Green。混合物（Applied Biosystems公司，USA），1微升的cDNA，1微升引物（上游和下游引物进行混合，每种引物为约2.5mmol·L-1），3微升双蒸水和在ABI 7500定量分析仪上反应。PCR扩增条件是：50℃（2分钟），预变性在95℃下10分钟，在变性95℃15秒，退火在60℃持续1分钟和40次循环。体链的最后阶段：95℃，15秒，60℃1分钟，95℃，15秒。据使用不同浓度镉的治疗青蒿预处理实验室，在黄色的青蒿素含量进行了分析，青蒿叶L.强调镉1天，7种治疗浓度，3个处理通过治疗。物学重复，21个样品中的总（以减少对在参考基因内部稳定性的差异分析的个体差异的影响，本实验中使用的Ct在分析三个生物学重复所有样品）和每个样本3种技术。复并设置阴性对照。据分析在qRT-PCR结束后，使用ABI 7500定量分析仪软件版本2.0.1自动分析数据，并使用每个样品的Ct获得geNorm，NormFinder，BestKeeper，Delta CT方法和RefFinder分析每个内部参考。经分析了该基因的稳定性。GeNorm软件首先计算稳定性的每个内部参照基因候选的（M）的值，并且计算变化对参与内部参考，即Vn的某些内部参数/ N 1的基因的稳定性内部候选参考已经被分类由M和通过Vn的确定所需的内部参照基因的最佳数目/ N 1的NormFinder软件通过组合该组内方差和之间的方差，计算值稳定根据稳定值的大小分组并评估内部参考基因的稳定性。geNorm软件和NormFinder软件解析数据时，他们必须将Ct转换为相对定量的数据，然后再将其导入各自的Microsoft Excel进行稳定性分析。据转换的具体方法是寻找最低的Ct（所有样品中内部参照基因的Ct），即样品中基因的最高表达水平。样本设置为1，然后减去所有其他样本的最低Ct。们获得Ct，ΔCt，并且通过2-ΔCT计算所有其他样品的表达水平。后，将表达式数据导入Microsoft Excel，并根据geNorm和NormFinder软件规范使用后续分析方法。BestKeeper该软件执行根据每个内部参照基因候选的Ct上成对样品的相关性分析，计算各对之间的标准偏差（SD），变异系数（CV），相关系数基因（泊松相关系数），并将内部参数作为SD的函数进行评估。因的稳定性。尔塔CT方法结合基于样品中的每个内部参照基因候选的Ct内部参考候选基因，计算ΔCT中，ΔCT的意思是，在所有样品中的成对基因的标准偏差（SD），然后计算内部参考基因和其他内部参数。于平均标准偏差的值评估匹配后的平均标准偏差（标准偏差）和最终参考基因的稳定性。BestKeeper软件具有与德尔塔CT方法共同的是，它没有必要直接转换的2-CT .DELTA.C吨和分析的Ct函数数据。efFinder集成上述四种分析方法并且当通过四种类型的分析方法评估时，计算每个基因的等级的几何平均值，并获得完整的排序指数。指数越小，内部参考基因越稳定。果内源参照基因引物扩增的特异性和效率通过qPCR分析评估，使用不同浓度的青蒿叶处理镉。部参考PCR基因融合曲线由ABI 7500定量分析仪2.0.1版软件自动绘制。果显示只有一个信号峰，表明引物的特异性很好。样品cDNA连续稀释（5个稀释）一定倍数。坐标表示LG [起始DNA]，相应的CT被绘制在纵坐标，并计算标准曲线的斜率，然后根据公式（1 E）= 10-1 / K来计算的效率扩增E.内部参考基因特异性的每种引物的参数如表2所示。2 qRT-PCR分析中内部参考基因特异性的5个引物参数表2分析得到的参数分析内部参考基因的表达谱在21个样品（Ct）中的五个内部参照基因的表达水平。布表明，在不同浓度的镉条件下，候选内参照基因Ct为15.91~26.59。另一内参照相比，18S rRNA的表达水平在同一样品中最高，并且Ct为15.91。是在所有样品中的最小的范围内移18S rRNA基因的Ct，ΔCT为3.78，随后的肌动蛋白，ΔCT为4.63，PAL，偏差和ΔCT的最大范围是5.95，如图1各样品中ΔCT内部参照基因的变化表示内部参照基因的表达是不恒定的在一定程度上，所以有必要选择适合定量的内部参考基因。不同的治疗组geNorm分析的参考基因稳定性分析中使用的geNorm程序来分析每个参考基因的表达的稳定性和通过计算值d排序基因表达的稳定性基因的稳定表达（M）。稳定性高，参见图2结果表明，青蒿的内部参照基因的表达的中镉的高浓度稳定性为18S rRNA基因/肌动蛋白> PAL> GAPDH> RPC。以看出18S rRNA和肌动蛋白的表达最稳定，CPR的稳定性最差。用的每个样本的参考基因的Ct用SPSS 17.0分析，框分别代表第25和第75百分位数，在框的中央线代表中位数和表示所述值的上部和下部线最大和更低。的不同浓度的5个内部参照基因的qRT-PCRFig.2géNorm稳定性分析的五个参考基因的qRT-PCR的Ct图1分布五个内部参照基因最小值的Ct图1分配使用分析程序ACTL不同浓度的镉NormFinder分析的下测试所有样品中由geNorm作为计算基因表达和五个参考基因的排名镉处理图2稳定性肌动蛋白基因表达的稳定性，18S rRNA，PAL，GAPDH，CPR，稳定值分别为0.341，0.462。0.505，0.533，1.376，根据稳定值越小，基因表达越稳定的原则。参照基因的稳定性来自肌动蛋白> 18S rRNA> PAL> GAPDH> CPR，这与geNorm程序分析的结果大致一致。动蛋白表达在不同镉浓度下最稳定，CPR的稳定性最差。BestKeeper分析使用BestKeeper软件分析候选内部参考基因的表达稳定性。SD大小的顺序是18S rRNA> GAPDH>肌动蛋白> PAL> CPR。
此，在不同镉浓度下，18S rRNA的表达最稳定，CPR的稳定性最差。
过比较上述两种分析方法，BestKeeper在分析结果上与geNorm和NormFinder不同。Delta CT分析用Delta CT法分析肌动蛋白，18S rRNA，PAL，GAPDH和RCP基因表达的稳定性。个参考基因的平均标准偏差（Mean Std Dev）用于对基因表达的稳定性进行排序。隙越大，越低的基因的稳定性高，见表3。果表明，青蒿的内部参照基因的表达的不同的镉浓度下的稳定性的来源肌动蛋白> 18S rRNA> PAL> GAPDH> CPR，这意味着肌动蛋白表达在不同镉浓度下最稳定，并且CPR稳定性最稳定。分析结果与geNorm和NormFinder的结果基本一致，但BestKeeper分析的结果存在一些差异。3的参考基因对内部匹配的参考基因表3的比较的比较注：平均ΔCT表示成对基因在21个样品的平均差值和标准偏差表示的Ct基因的变异匹配21个样本。析RefFinder RefFinder是基于它结合了4个电脑程序及以上（geNorm，NormFinder，BestKeeper和Delta CT），便于使用的方法在网络上的在线分析工具。Ct直接连接并导入程序中，点击“分析”按钮，获得每个参考基因的稳定性排序。计算内部参考基因的排名（分别通过geNorm，NormFinder，BestKeeper软件和Delta CT方法）。名的几何平均值用作完整排名。不同浓度的镉的青蒿的内部参照基因的表达的稳定性：肌动蛋白> 18S rRNA基因> PAL> GAPDH> CPR，参见图3。3分析RefFinder稳定性下不同的镉浓度处理图3 5个的内部参照基因：基因表达的稳定性和排五个参考基因如通过RefFinder五种分析方法不同的合成镉浓度下测试所有样品中计算上述geNorm程序的结果，NormFinder程序，德尔塔CT方法和程序RefFinder基本上是相同的和BestKeeper程序的分析的结果是与第一四种方法的不同，这主要是因为不同的程序和方法基于不同的数学算法。中，RefFinder是其他四个程序和计算方法的集合（geNorm，NormFinder，BestKeeper软件和Delta CT方法）。此，在分析参考基因的内部稳定性时，建议使用RefFinder程序分析结果。定不同处理组内部参考基因的最佳数量在qRT-PCR中，使用内部参考基因被认为是最合适的标准方法[18]，并使用次优的内部参考会扭曲数据分析[19]。而，使用单一参考基因进行校准和标准化可能会对结果的准确性产生影响[20]，以消除使用单一参考基因引起的偏差。Vandesompele等[8]在标准化过程中使用了几个参考基因。几何平均值校正为归一化因子。本文中，Vandesompele等人的计算方法。于选择的参考基因internes.Selon由GeNorm程序的稳定性分析的候选的内部参数的最佳数目，更稳定的内部基准的两个基因（Vandesompele等人推荐的是至少为3）是用于所有样品。后将归一化因子（NF2）逐渐引入最稳定的内部参考，直到引入内部参数n 1对NFn 1没有显着影响。于新NF标准的附加内部参考通过计算成对变化Vn /（n 1）来反映。大的V意味着引入的内部参考对新的NF标准有显着影响，因此有必要引入新的内部参考。Vandesompele的默认值为0.15。果Vn /（n 1）大于0.15，则必须引入n 1eme基因，否则不必引入新的内部参照基因。0.15 Vandesompele等人提出的值只是一个参考值，有必要根据自己的经验和自己的实际情况来选择内部参考基因的最佳数目。四个基因的增加具有最小的V值，并且不必引入第四个基因。NFn 1和NFn的色散图的分析表明，NF4与NF3具有高相关系数，这也表明不必引入第四个基因。三种内部对照（肌动蛋白，18S rRNA，PAL）的内部参考基因的最佳组合进行了详尽的分析，如图2所示。4。4图4的测定确定归一化上述结果的最佳数量的内部参数的标准化的指示基因控制青蒿候选的内部参照基因不同浓度的镉处理下。者之间的稳定性非常不同，必须在qPCR分析期间进行内部参考基因的筛选。而，在相同的处理条件下，青蒿或其他物种中没有文献表明是否还需要对内参照基因进行稳定性分析。
此，该RefFinder程序用于分析相同的环境下处理青蒿的内部参照基因的稳定性，如表4所示。果表明，出现了在稳定性差候选内部参考基因之间，即使在相同的处理条件下。论geNorm软件NormFinder和其它BestKeeper并且该方法德尔塔CT被用来分析在候选traitement.Les结果不同组内部参照基因的稳定性表明，géNorm，NormFinder，表4的分析RefFinder对五个内部参考基因的稳定性进行相同浓度的镉处理。4基因表达的稳定性和通过使用RefFinder CT和CT德尔塔的相同的方法测试浓度在所有样品中计算出的五个参考基因的排名基本上是相同的，但是从的结果不同BestKeeper分析;因此必须进行定量分析。四种方法的结果进行了全面分析，以寻找稳定的内部对照。这项研究中，Xie等人的RefFinder分析方法。[12]用于结合的四个结果的dessus.Les结果表明，内部参照基因候选的稳定性在不同的治疗组的顺序是肌动蛋白> 18S rRNA基因> PAL> GAPDH> CPR。外，几个内部参照基因的基础上，它往往是更准确的校正使用单个gène.Il可以使用肌动蛋白，18S和PAL，三个内部参照基因进行分析的结果不同浓度镉处理后青蒿功能基因表达水平的变化校正以提高分析结果的可靠性。
了确定在相同处理条件下表达分析中是否仍需要内部参考筛选，还分析了同一处理组中候选内部参考基因的稳定性，结果显示候选内部参考基因在同一治疗组中不一致。此，使用qPCR来分析表达的差异时，有必要筛选内部参照基因，即使在相同的工艺条件，以便不影响分析的结果表达。时PCR技术非常灵敏，特异，快速，广泛应用于基因表达差异分析研究。而，计算样本之间基因表达的差异包括生物学差异和非生物学差异（实验差异，如起始样本量，提取效率和RNA质量;逆转录效率和酶）。应）[21]。此，必须对实验的每个步骤进行标准化，以尽可能消除非生物学差异。许多标准化策略[1]中，考虑到是否可以控制整个实验过程，使用一个或多个恒定表达内部参考基因的标准化是目前最常用的方法。而，由于内部和外部环境的影响，细胞中没有真正恒定的基因。Jain等人[22]发现UBQ5和EEF-1α被始终如一地在不同组织中通过检测的18S和25S rRNA的riz.Les稻10个内部参照基因表达的不同环境下的处理稳定地表达。Yan等[23]发现，当筛选来自6个柑橘RT-qPCR的7个内部参考基因时，18S rRNA，ACTB，rpII的表达最稳定。Nicot等[24]使用马铃薯马铃薯作为材料分析了7种常用的内部参考基因，发现efα是最稳定的内部参考基因。
Hu等[25]研究了七种常用内参照基因和七种内部大豆大豆参考基因的应用。
们还发现SKIP16，UKN1，UKN2是所有样本中最稳定的内部参考基因。以看出，在目前的研究中，内部参考基因在特定细胞条件下是相对稳定的表达。此，有必要根据不同的实验条件选择一种或多种相对稳定的内部参考基因，以消除非生物学差异并提高实时定量PCR分析的准确性。之，本研究检查了若干可靠内部参照基因用于治疗下镉青蒿的基因表达的分析，并使用了遗传多参数校正用于改善的准确度实时PCR分析，以及其他条件。青蒿基因表达的分析是一个很好的参考。
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