使用纸片法，稀释平板计数方法的总黄酮樟脑油，金黄色葡萄球菌的总多糖，枯草芽孢杆菌的测定方法中，大肠杆菌三种类型的细菌的抗菌活性的。果表明，类黄酮片樟，金黄色葡萄球菌的总多糖，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌显示出在该MIC剂量依赖性抑制活性分别为16.000，8.000，16.000毫克/毫升至16，000，16000 32000毫克/毫升MBC分别为16.000，16.000，32.000毫克/毫升和16000，32000，64000毫克/毫升。树叶中的总黄酮和总多糖显着破坏了所测试细菌的正常生长过程。黄酮，多糖，抗菌活性中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1002至1302年（2015）11-0408-03收稿日期：24/11/2014基金：四川省基础研究项目（No. 2011JY0050）;四川省科技创新研究组文化计划（No. 2011JTD0035）;四川省高校创新研究团队建设规划（No. 14TD0031）。者简介：杜永华（1978-），男，四川遂宁，硕士，讲师，主要从事天然产物及其生物活性研究。子邮件：yonghuad@163.com。讯作者：魏琴博士，植物资源开发利用教授主要从事。
子邮件：weiqin2011-67@163.com。[樟樟（宝洁）N.超]属于樟属樟科是中国特有的，主要产于宜宾市，四川省，其叶含有丰富的香精油，食品，调味品，药品，日用化学品，产品原料的重要来源[1-2]。树（Cinnamomum camphora（Linn。Presl是同一属的植物，其进行各种药理活性。研究表明，桉树叶的挥发油包含高抗菌活性[3-6]和所提取的油状残余物后除去挥发性油有抗菌作用[7-10]。前，关于从油茎叶中提取挥发油后残留物的化学成分和生物活性的研究很少。脂叶片中总黄酮的抗菌活性尚未见报道。
这个实验中，在去除油叶的挥发油后的残渣总黄酮的抗菌活性进行了研究，其目的是为开发和使用油性资源的基础。料和方法材料和试剂从外地乡，宜宾油樟种植园丘，芦丁标准收集的油樟叶（含量≥92.5％，批号100080-200707，中国药品生物制品检定所）; d（ ）的标准无水葡萄糖（≥98％含量，贵州迪达科技有限公司），青霉素G钾盐（1440 U /毫克，Sigma公司），硫酸链霉素（720单位/毫克， Sigma）其他化学试剂在国家层面上具有分析纯度。株和培养基大肠杆菌，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌是由实验室键肥料资源和四川大学的应用程序提供。营养琼脂液体培养基（NA）为0.5g牛肉提取物，1克蛋白胨，
香樟0.5克氯化钠溶解在通过加热和搅拌100ml蒸馏水水，调节pH值在7.3±0.1下，在121℃下高压釜20分钟。培养基中加入1.5g琼脂作为固体培养基。要仪器AR2130电子天平（赛多利斯），TU-1901紫外可见分光光度计双光束（北京普析通用仪器有限公司），冷冻干燥机LG-5A真空（离心机机械有限公司下，上海研究所）。
天然干性油的鲜叶叶总黄酮制剂，干燥将挥发物从油，通过水蒸汽蒸馏残余物（60±1）℃取出，再将其喷涂在从60至80目粉末片樟50 g载体，通过固液比的溶液中加入克1：21毫升体积分数的50％乙醇溶液，浸泡在室温下36分钟，88℃萃取回流水浴105分钟，过滤，滤液在60℃下浓缩，减压萃取，加入100ml蒸馏水。石油醚适量的加入到石油醚层无色，并浓缩至50ml水层中，加入乙醇以调节的80的最终乙醇浓度％，4℃的醇沉淀天（以除去多糖，蛋白质，单宁酸和其它杂质），过滤，将滤液在减压下浓浆浓缩，并在真空下冷冻干燥，得到原黄酮。茎叶中总黄酮含量由显色体系NaNO2-Al（NO3）3-NaOH测定[11]。储备溶液在10％乙醇中的64.00 mg / mL的浓度制备的原油黄酮类化合物和使用直径0.22微米的微孔滤膜过滤除菌。
不可少樟多糖片材的制备物中除去接合樟脑油油60离开粉末80目筛干燥50克，按1克固体 - 液体比：在100度]回流下加入20毫升水C萃取水浴3小时，过滤，滤液浓缩至。1/5体积，加入的乙醇溶液在4℃下过夜，在12 000转/分钟离心在寒冷的5分钟，冷冻调节最终乙醇浓度80％，醇沉淀沉淀并获得总多糖。过苯酚和硫酸法测定油覆盖叶的总多糖含量。
具有64.00 mg / mL的无菌水的浓度的储备溶液制备的粗多糖原油和使用直径0.22微米的微孔滤膜过滤除菌。变及制备细菌悬浮液在无菌条件下的活化，所保藏菌株在NA板的培养基中并培养移植在37℃下为18至24小时的单菌落接种到5ml的液体培养基中无菌NA在37°C孵育18〜24 h;采取0.5毫升细菌悬浮液中，加入4.5毫升NA液体培养基，计数用血细胞计数器，将细菌悬浮液用液体介质中稀释，得到NA的浓度105〜106 CFU / mL的[7] ，储备。菌效果的测定通过纸琼脂扩散法[12]测定试验物质的抑菌效果。性滤纸加工成圆形片的6mm直径的纸，在121℃下放置在一个干净，干燥的试管中并灭菌湿热灭菌20分钟。定水吸收过滤纸100的量，按照滴加在无菌条件下不同浓度的液体的水的吸收量，从而使总油黄酮樟脑含粗叶总粗多糖药物分别512.00，256.00，170.67微克/片剂，含有青霉素G钾盐10U /片剂，硫酸链霉素10毫克/片，阳性对照纸干燥在37°C下密封并保持在低温下。0.5mL的各细菌悬浮液施加到NA板以及含药物四个过滤纸的中间放置在每个板，总黄酮和片材的总多糖和阳性对照的3个浓度梯度。
度为3平行。添加到溶剂中的培养基用作溶剂对照，将非细菌培养基用作无菌对照。育在37℃下在恒温培养箱中24个小时，以查看是否有抑制区（如果是的话，测量抑制区的直径用游标卡尺）。
倍稀释的方法的最小抑制浓度（MIC）的测定[7]将粗产物油樟黄酮，将粗产物与对应于无菌溶剂64.000，32.000，16.000，8.000，4.000，2.000总多糖稀释，1.000，0.500，0.250，0.125溶液串联毫克/毫升，分别，总黄酮0.5 ml总溶液的液体介质多糖NA4毫升，将0.5ml细菌悬浮液，充分搅拌的，37℃，摇床115转/分细胞培养24个小时，并重复每个浓度3个fois.En同时，无菌对照组（NA液体不含细菌培养基）和溶剂对照组与所述（细菌NA液体介质相应的溶剂）固定。过肉眼观察观察每个试管中细菌的生长，并且总无机细菌的浓度是最小抑制浓度（MIC）。于所述MIC最小杀菌浓度（MBC）的测定，该管从未见过细菌在培养生长被添加到与该液体介质4.5毫升NA提取0.5毫升，并24小时，37℃培养，将0.1ml培养物使用织物帐户板的涂布方法，少于5个菌落的最低浓度是总黄酮桉树叶拍摄，并细菌总多糖的最低杀菌浓度（MBC）[7]。于测量抗菌咀参考曲线陶瓷如[4]，与来自原油NA总黄酮液体介质离开毛总浓度配制MIC多糖的方法，三种类型的细菌在接种105 CFU /毫升的最终浓度，充分混合并在37℃，1.0吸取细菌溶液的混合物在0，2，4，8，12，24，36，48小时，稀释10倍，加入19毫升NA介质和混合物。
成板37℃培养24个小时，对菌落进行计数来计算1倍毫升稀释对菌落作为因变量的数目的对数的活细胞计数，以独立变量的温育时间是绘制在笛卡尔坐标系，即，得到油状物在对细菌的总类黄酮或总多糖桉树叶的时间含有相应细菌空白对照的抑制曲线，和。果和总黄酮樟脑油的分析，樟脑油多糖的挥发油的黄酮克萃取的提取后通过叶渣的提取量至醇的总含量，冻干所述黄酮樟脑油4.60克粗产物，通过比色法樟脑油黄酮测量原油总黄酮是381.83毫克/克，总黄酮片樟提取3 51％，如从粗多糖的整个叶子获得油为2.65克，进行苯酚 - 多糖的方法硫酸多糖的总总含量总值371.22毫克/克多糖的总提取率为1.97％。黄酮片抑制作用在多糖的表1中所示，类黄酮片樟，细菌的三种菌株的总粗多糖有抗菌作用，抑制圈的直径为片材的药物含量增加增加并显示出对剂量的一些耐受性，但低于阳性对照组。枯草芽孢杆菌总黄酮，大肠杆菌面积的抑制基本上大于总樟脑油原料多糖，樟脑油但抑制金黄色葡萄球菌的的区域的整体粗多糖较大优于总樟脑油黄酮类原料产品。药物的相应组的细菌的阳性抑制的区域已达到抗微生物美国研究所（CLSI）的测定灵敏度灵敏度的水平和有对照组和溶剂组中没有异常无菌控制。制区的直径对金黄色葡萄球菌512.0微克/板樟毛总黄酮为10 U /片30.3％青霉素G，枯草芽孢杆菌的抑制区的直径为50， 0％青霉素G钾盐。2显示了叶中存在的总黄酮和总多糖的最小抑制浓度。
菌对照组无菌生长，对照组溶剂生长。总黄酮和金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌的总多糖，大肠杆菌的最小抑制浓度是16.000，8.000，16.000毫克/毫升和16.000，16.000，32.000毫克/毫升。3显示了桉树叶中总黄酮和总多糖的最小杀菌浓度。菌对照组无菌培养，溶剂对照组显示细菌生长。樟脑油黄酮，金黄色葡萄球菌的总多糖，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌的最小杀菌浓度24个小时后分别为16.000，16.000，32.000毫克/毫升和16.000，32.000，64.000毫克/毫升。黄酮樟脑油，抑菌多糖的总曲线显示在。
1到。3中，三种细菌可以在溶剂控制下正常生长，有明显的适应性，对数期，稳定期，下降期。樟叶总黄酮，总多糖的MIC 1次，金黄色葡萄球菌有下降的直接访问，表现出显著的杀菌作用;总黄酮1倍MIC为枯草芽孢杆菌，大肠杆菌延伸适应的时期，没有明确的对数期，静止期24小时生长缓慢的，但内相对于溶剂对照组的存活细胞的数量，然后在下降阶段;结论和讨论结果表明，类黄酮叶樟油，金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的总多糖有一些与总黄酮和总浓度的增加的抗菌活性和抗菌作用的增加在多糖中。
黄酮樟金黄色葡萄球菌的MIC，MBC和相同的总多糖，表明总黄酮，金黄色葡萄球菌的多糖的总抑制等效。枯草芽孢杆菌，大肠埃希氏菌MIC黄酮，MBC均低于总多糖低，表明枯草芽孢杆菌总黄酮，大肠杆菌中总多糖的强的抑制作用。种现象类似于总黄酮和金黄色葡萄球菌的guangshiwei多糖，枯草芽孢杆菌和大肠杆菌[12]的效果。金黄色葡萄球菌，大肠杆菌的抗菌活性叶油总黄酮（MIC分别为16000毫克/毫升）比油樟叶乙醇提取物更强（MIC分别为31.25毫克/毫升）[7]。脑油和樟脑相同植物叶乙醇提取物的挥发油后除去主要成分是类黄酮，其中黄酮对金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌具有很强的抗菌活性[13- 14。以看出，油性桉叶的总黄酮可能是油茎叶乙醇提取物的主要抗菌成分。黄色葡萄球菌的多糖叶和大肠杆菌的总油的抗菌活性（MIC为16.000，32.000毫克/毫升）比樟脑片材的提取物降低（MIC为15.63毫克/ ml）的[15]。崇禄的研究表明，香椿的水叶提取物含有更多的多糖成分[16]。是，目前还不清楚总多糖桉树叶的抗菌活性是否大于总多糖香茅叶低。
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