使用樟脑叶作为测试材料，SRAP-PCR分子标记系统用于筛选420对引物。果表明，共筛选出19对引物，扩增出367条带，平均15条至25条之间有19.3条带。中，多态性条带230条，其中平均12.11，范围从6到17；多态性的比例为62.16％，范围从40％到81％。SRAP-PCR分子标记系统是稳定的，引物组合可用于研究遗传多样性和鉴定来自樟树不同产地的品种。树（L.）Presl，也被称为樟树（L.）Presl，是属于樟树属的常绿树。主要分布在中国长江以南。适用于酸性，深厚肥沃的土壤和热量。潮湿的气候，耐旱，干旱和盐碱土壤是中国景观，森林和经济树木的主要种类。年来，中国长江以北的樟树种植面积越来越大，但是由于引入地点和来源地之间气候和土壤条件的巨大差异，冬季低温和土壤中的盐碱环境已成为限制。中国北方成功引进和栽培樟子松的关键因素，选择耐寒和耐盐品种已成为当务之急[1]。前，关于樟树优良品种选育的研究主要集中在遗传物质资源，田间后代生长特性分析和优良家族的早期选择等方面。
[2]。树的生长发育受环境影响很大，地理类型很多，实际后代的变异程度也很明显[3-4]。统的标记方法，例如形态标记，同工酶和核型分析，很难区分樟脑树种。种间或物种间的关系和DNA标记技术可以在基因组水平上探索植物物种与克隆之间的遗传变异，并且不受土壤中气候和环境因素的影响。
容丰富，可以更好地反映植物物种和物种之间的遗传变异。增序列连锁多态性（SRAP）是Li和Quiros开发的一种分子标记技术[5]。植物的研究，例如观赏南瓜（Cucurbita moschata）[6]和Buchloe dactyloides [7]，表明SRAP优于ISSR（单序列重复），SSR（单序列重复）和RAPD（扩增多态性） DNA等多种分子标记具有更丰富的遗传多样性，具有操作简单，多态性丰富，引物使用率高，重现性好等优点。成本[8]。
SRAP标记技术已广泛用于品种鉴定，遗传多样性分析，遗传变异和亲缘关系分析以及指纹图谱的构建[9]。于樟脑的分子标记，宋爱云等。[4]应用RAPD分子标记技术在2003年鉴定了喜树和普通樟脑菌株。[10]还建立了普陀樟脑SRAP反应体系，目前尚无关于樟脑SRAP分子标记的研究报道。此，研究团队使用成熟的SRAP-PCR反应系统筛选了420个引物对，为寻求樟脑遗传多样性和相关遗传研究提供了技术支持。子标记辅助选择的基础已经奠定。验材料本次试验共选择了14个样品（表1），包括浙江，江苏，江西，安徽等地，并将该营地收集并移植到樟脑中。自宿迁学院，于2018年2月至4月。
因组DNA的播种，提取基础于2019年4月。使用的前后SRAP引物基于先前研究人员发表的引物序列[5-10]，并且具有由深圳市华达矩阵技术有限公司合成。买了与PCR 10X Buffer，Mg2 ，Taq DNA聚合酶，dNTP和DNA标记物相关的试剂。自天根生化科技有限公司使用试剂盒法（从平浩生物技术有限公司购买）提取和检测基因组DNA，以从樟脑中提取基因组DNA，基因组DNA的质量为用1％琼脂糖凝胶电泳（电泳仪的电源是American BIO-RAD Powerpac Basic）测量。电泳仪为北京骏益JY-SPCT型），电泳后，在自动凝胶图像分析仪（上海培清JS-780R自动凝胶成像分析仪）上观察，确定纯度DNA，然后拍照。用核酸蛋白质分析仪（BioPhotometer D30）确定其浓度和A260 / A280比例。后，将样品的DNA浓度稀释至50 ng /μl，并保存在-80℃以便将来使用。PCR扩增系统SRAP-PCR反应系统为：2.0 mmol / L Mg2 ，0.2 mmol / L dNTP，60ng DNA模板，Taq DNA聚合酶1.5U，前后引物0.5 μmol/ L，加样缓冲液10X 2μL，加ddH2O至20μL。PCR反应程序PCR反应程序如下：在94°C下预变性5分钟，在94°C变性1分钟，在35°C变性1分钟，在72°C延伸1分钟5个循环，在94℃变性1分钟，在51℃变性1分钟，并在72℃延伸1分钟，进行35个循环，在72℃延伸5分钟，并在4℃保存。PCR扩增产物在8％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离，用银染色后，照相并记录在可见光箱中。物的筛选：在测试材料中，选择了3种外观差异较大的樟脑DNA矩阵来筛选420对SRAP引物。后，选择了高清晰度的SRAP引物，良好的稳定性和丰富的多态性，并扩增了DNA样品（表2）。据处理和分析凝胶电泳结果中的清晰且易于识别的条带根据其存在与否进行计数。一位置的磁带记录为“ 1”，磁带记录为“ 0”。
算扩增产物的多态性位点的数目和多态性的百分比。脑DNA的提取和检测已经确定。14个樟脑DNA样品的平均A260 / A280值在1.7至2.0之间。过0.8％琼脂糖电泳后，条带清晰并符合扩增的基本要求（图1）。
SRAP分子标记引物组合多态性的筛选与分析。用14个樟脑种子DNA样品作为材料，SRAP分子标记系统用于筛选420个引物对。除了模糊且条带较少的底漆，并且清晰，明亮，大量的底漆。后，从420对引物组合中选择了19对高特异性引物，共获得367条带，平均15条至25条带为19.3条。中有230条。态性带，平均为12.11，范围从6到17；多态性的比例为62.16％，范围为40％至81％（表3）。
SRAP-PCR反应的引物序列和扩增方法是特异性的，所反映的遗传多态性直接揭示了植物不同基因组DNA之间的差异[11]。SRAP-PCR测试的结果被认为与温度和五个因素的浓度有关：Mg2 ，dNTPS，引物，Taq DNA聚合酶和DNA模板[12]，以及SRAP-的影响因素。同物种中的PCR差异也很大。可能与不同植物本身的遗传差异有关，也可能与研究人员定义正交设计时不同因子浓度的不同参数有关。
外，不同研究人员使用的仪器和设备不同，凝胶的质量和浓度也不同，这也可能是SRAP-PCR测试结果不同的原因。此，必须针对不同植物种类，不同测试条件，不同测试设备和试剂的主要影响因素优化合适的SRAP-PCR反应系统，以确保测试结果的稳定性和可靠性。前，关于SRAP分子标记的引物筛选的研究很多。大龙等。[8]选择了19对SRAP引物组合，可以扩增葡萄中的清晰引物和多态引物。Baiyi等人[12]从176对SRAP引物中选择了25对适合白檀木的引物。芳芳等。[13]研究了96对SRAP引物组合，获得了18对清晰，稳定和多态的引物，作为甘薯基因组的引物集。
这项研究中，将20个直接引物和21个反向引物随机组合以获得420个引物对，其中19个组合可以扩增樟脑DNA的清晰和明亮条带。以看出，SRAP引物的组合在不同植物的基因组上具有不同的结合位点和数目，从而导致不同的扩增效果和适用的引物。物的顺序是SRAP-PCR扩增过程成功的关键。
使建立了最佳的PCR扩增系统，如果引物的选择不是特异性的，实验结果通常也不理想[11]。]。获得最佳PCR扩增系统的基础上，本研究筛选了420对引物，
香樟树并从中初步选择了19对引物。过分析这些引物的SRAP-PCR多态性数据，条带总数为367个。中，多态性条带数量达到230个，扩增产物片段大小均小于2000 bp，且分布均匀。均匀，具有62.16％的多态性。为遗传多样性研究，品种鉴定，亲缘关系分析以及樟树樟遗传图谱的构建奠定了基础。
本文转载自
香樟树 http://www.jshmcyz.com
