为了研究茉莉酸甲酯（MeJA）对樟芝牛樟脑产生三萜和多糖以及在MeJA上诱导Ca2 的影响，将MeJA溶液添加到基础培养基中。芝的发酵，不同浓度分别固定（0、25、50、100、200μmol/ L），不同时间（0、2、4、6、8 d），三组不同培养后检测牛樟芝生物量，三萜类，细胞外多糖和细胞内多糖的培养后实验还测试了添加CaCl2的含量和效果。果表明，MeJA处理牛樟芝对发酵产生的三萜类化合物和多糖总量有积极作用，并在Tween-80中间加入50μmol/ L的MeJA溶液。培养4天时促进发酵效果更好。外，与单独使用MeJA相比，用MeJA和CaCl2处理的牛樟芝生物量，三萜，胞外多糖和胞内多糖的含量明显增加。金项目：云南省青年项目科技计划项目（编号2016FD096）。
者简介：张志智（1988年至今），女人，云南个旧，硕士，副研究员，研究方向是森林微生物资源的开发利用。子邮件：@ qq.com。
讯作者：生态与森林保护研究连荣，硕士，研究部助理教授。子邮件：@ qq.com。芝牛樟芝（Antrodia camphorata），是樟芝牛樟属（Antrodia camphorata）属，是担子菌（Basidiomycotina Hymonomycetes）的一个属，属于Poly科（Polyporaceae）。（牛樟芝）是一种罕见的药用蘑菇[1]，被称为“森林里的红宝石” [2]。
樟芝的三萜类化合物是其主要药用化学成分，可起到保护肝脏和肝脏，抑制癌细胞生长，降低血压和消炎的作用。物种是灵芝的几倍，樟芝的三萜已成为樟芝发展的研究方向之一[3]。外，樟芝中所含的多糖具有提高免疫力和抑制病毒的作用，对肝脏的保护也有一定作用[4]。
莉酸甲酯（MeJA）是一种脂肪酸衍生物，在植物体内的信号传递中起作用，并可以显着促进植物体内次级代谢产物的产生[5]。前的研究表明，当将MeJA作为诱导剂添加到灵芝和斜纹夜蛾的发酵培养基中时，与对照相比，发酵后的三萜的收率明显提高了[6-7]。这方面，尚未报道对委陵菜属的牛樟芝的研究。
外，钙（Ca）是生物生长的必需营养素，参与生物组织的形成，调节生物的生长和发育，并参与对植物胁迫的生理反应的调控[8]。些研究表明，Ca2 参与MeJA介导的信号转导过程。如，马宏思等人发现外源的Ca2 离子可以进一步增强MeJA诱导的白桦细胞悬浮液中三萜的作用[9]。是，没有关于MeJA诱导三萜类化合物引起真菌对Ca2 的促进作用的报道。于三萜类和多糖在牛樟芝中的高药用价值，本研究以牛樟芝为实验材料，研究了MeJA对牛樟芝两个药用成分的影响以及Ca2 处理对MeJA的影响。加三萜和牛樟芝多糖产量的方法。研究中使用的菌株是从中国台湾引进的优良牛樟芝菌株。养基和菌株的培养条件培养基的基本配方：葡萄糖25 g，蛋白5 5 g，麦芽糖3 g，酵母提取物3 g，KH2PO4 1 g，MgSO4 1 g，1 g维生素B1、1升水，pH 5.5。备孢子悬浮液的方法：收集牛樟芝培养皿20天，并用20ml无菌水洗涤培养皿表面的孢子以备后用。
本培养方法：将100 ml基础培养基放入500 ml锥形瓶中，插入1 ml牛樟芝孢子悬浮液，在振荡器上以100 rpm和26℃恒温孵育12天，然后收集菌丝体。要试剂茉莉酸甲酯购自Sigma。墩果酸和其他试剂购自昆明腾科科技有限公司。试的时间和地点该测试于2018年3月至2018年7月在云南森林学院的实验室中进行。品的处理（1）用最终浓度为25的无水乙醇制备MeJA。50、75、100、200μmol/L。无菌的0.2μm针式过滤器过滤灭菌后，根据摇瓶的基本发酵方法，将其加入培养基中4天添加量为2μL/ mL。个过程重复3次。养后，取样以分析生物量，总三萜，细胞内多糖和细胞外多糖。入培养基中，摇匀培养物，每次处理设置3次重复。育期后，取出样品进行分析。用无水乙醇，吐温20和吐温80作为助溶剂，将MeJA配制成最终浓度为50μmol/ L的溶液.4天后，将其添加到培养基中不安3次重复。
养结束后，取出样品进行分析，并检查最佳的MeJA添加方案。据最佳MeJA添加方案，将CaCl2同时添加到培养基中，以使CaCl2的最终浓度为75 nmol / L。外，设置了两组对照组。
MeJA和CaCl2分别添加到培养基中。立3个独立的经验。养后，取样以分析生物量，总三萜，细胞内多糖和细胞外多糖。物量测量有关生物量测量方法，请参阅文献[10]。过抽滤分离发酵液和菌丝体。蒸馏水将菌丝体洗涤几次，直到洗涤溶液变为无色，将其置于干燥箱中，并在70℃下干燥至恒重。燥菌丝体的准确度为0.001。g称重电子天平，即获得菌丝体生物量。前，阐明了MeJA诱导微生物中三萜类化合物产生的机制，这些萜类化合物是通过甲羟戊酸途径由单一异戊二烯合成的，可以促进hmgs，hmgr， mvd，与fps，
香樟sss，osc，lss和ss相关的基因的过表达[18-21]。Por为研究对象，探讨了MeJA诱导三萜生成的作用和机理，发现在发酵的第四天加入MeJA溶液（150μmol/ L）可以提高发酵效率。白色组相比，将三萜类化合物的含量提高了0.55倍；实时荧光定量PCR分析表明，sqs（来自甲基戊酸途径的角鲨烯合酶基因）和fps（法呢基焦磷酸合酶基因）的表达水平显着上调[22] 。昂还使用灵芝作为材料，探索了受MeJA影响的三萜生物合成途径中编码酶的关键基因的转录。果表明，hmgr，fps，sqs，osc等基因被诱导表达自己[23]。具有多种生物学功能，并且是第二个非常重要的信使：通过改变细胞质中游离Ca2 的浓度，可以将细胞表面接收的信号传输到细胞中，并对其进行接收和分析通过一系列效应器来调节生物体。微生物中，Ca2 的生长，发育和其他生理反应[24]通常扮演辅助因子或活化酶激活因子的作用[25]。这项研究中，当同时添加MeJA和CaCl2时，与单独使用MeJA相比，发酵牛樟芝的生物量，三萜含量，细胞外多糖和细胞内多糖含量显着提高。他实验组。果表明，Ca2 对MeJA发酵的牛樟芝产生的三萜类化合物具有积极的介导作用，这与王艳使用Ca2 诱导三叉类胡萝卜素产生三萜类化合物的结果相似。MeJA提出的桦木悬浮培养法[26]。
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