[目的]增加油菜内生细菌次生代谢产物的积累。[方法]各种诱导子（油性油状液体石油叶水提取物和鲤鱼愈伤组织）加入到内生细菌（YY26，YG42）的培养系统来研究内生细菌。长及其次生代谢产物（1，8-桉叶油素，松油烯-4-醇，α-萜品醇）的影响。[结果]从内生菌的生长，螨虫茧对内生YY26的增长显著抑制作用，但促进了两个内生增长YG42，混浊的油油腻牡蛎。长具有一定的抑制作用：油茎叶油提取物对两种内生细菌的生长没有显着影响。生代谢产物的积累，油杆的水性提取物离开上所生产的油从1，8-桉树，萜品烯-4-醇，α萜品醇的强促进作用两种内生细菌。桉树油1.8的推广效果最强。
桉树油水溶液的浓度为1.00％时，
香樟内生YY26-1.8桉树油的产量最高，为11.80倍当桉树叶油的水提取物浓度为2.50％时，对照组的浓度为对照组。生菌YG42中桉树-1，8油的产量达到最大值，比对照组高7.73倍。茧螨行使总挥发物的最强启动子效应：当浓度为10.00％，促进总挥发物的YY26内生细菌最高，比组更大的13.26倍控制。[结论]该研究已增加到一定程度的内生细菌（YY26，YG42），其奠定了基础其未来的工业生产内的次级代谢产物的积累。生细菌;桉树油1.8;萜品醇-4-醇; α萜品醇数CLC Q942文献代码A项目编号0517-6611（2017）20-0014-04Résumé[目的]为了提高内生真菌樟油樟的次级代谢产物的积累。[方法]不同电感器（油，水和提取物的愈伤组织樟C.）加入到内生真菌（YY26，YG42）C樟的培养系统来研究内生真菌的生长和它们的影响的次级代谢产物（1，8-桉叶油素，松油烯醇，α-松油醇）。[结果]对于内生真菌的生长，C.樟的老茧有YY26的生长有明显的抑制作用，但她对促进增长YG 42.石油C.效果Longepaniculatum对YY26和YG42的生长有一定的抑制作用。C. longepaniculatum的水提取物对YY26和YG42的生长没有显着影响。生代谢产物的积累，水提取物C.lon Gepaniculatum对1，8桉油醇，YY26和YG42的松油4ol和αterpinéol的产量最强大的促进作用，而且是最重要的推动者作用当水提取物浓度为1.00％时，最高YY26 1，8cineoles的产率比对照组高11.80倍。含水提取物中为2.50％，YG42的1.8％的产率最高。7.73倍。
照组愈伤组织C. longaniculatum对挥发性的次级代谢产物的最有力的促进作用C.樟的totaux.Lorsque浓度老茧为10.00％，她开发效果总挥发物乘以对照组的13.26倍。[结论]次级代谢产物YY26和YG42中C.积累的量改善樟，这可以是其工业产品的基础。来的教育关键词香樟（Cinnamomum longepaniculatum）;内生真菌; 1，8cinéole; Terpinen 4ol;植物内生真菌α-萜品醇在长期进化过程中与宿主细胞形成互利关系。前，关于内生菌逐年增加的生物效应的研究报告，对次级代谢产物内生菌的积累特别研究已成为热点[1-2]。于内生细菌直接从植物中分离，次生代谢产物的含量通常较低，工业化生产很困难[3-4]。此，改善植物内生菌中的次级代谢物尤为重要。前有许多方法来提高内生细菌的植物次生代谢物，其中生物因子（前体物质）被用作电感器作用于代谢物，有效和易于使用的方法[5-6]的积累。
物质的宿主细胞和内生真菌之间的交换，它可以是在宿主植物中，这促进了由内生细菌生产次级代谢产物的的细胞的前体物质。宿主植物细胞中提取相关代谢物及其作为内生培养系统增强剂的添加可以促进内生次级代谢物的积累。培养体系中内生细菌（YY26，YG42），作者添加的各种激发子（油性桉树油，油性痰水提取物油和愈伤鲤鱼）研究次级代谢产物内生菌的效果。旨在增加内生次生代谢产物的产量。料和方法测试材料三种类型的激发剂：油痰中的膨胀液油，桉树油叶的油提取物和油鲤愈伤组织。个物种内生细菌的：YY26 [真菌真菌从油干叶中分离，编号26，鉴定为子囊菌，拟内孢霉德克尔]和YG42 [油从根分离的真菌，编号42，是鉴定为属Hsplotrichum LK.ex大一] [7]的蜀的半知菌，通过资源的发酵宜宾学院和应用。级重点实验室。
1，8-桉油精，萜品烯-4-醇和α-萜品醇购自北京世纪奥克生物科技有限公司。板培养基（1L）：麦芽提取物20g，葡萄糖20g，蛋白胨1g，琼脂20g，pH5.0。酵培养基（1L）：20g麦芽提取物，20g葡萄糖，1g蛋白胨，pH5.0。感器的制备油/油水浊度诱导剂的制备。取新鲜油叶，洗涤，切割，置于烧瓶中并蒸汽蒸馏4小时。其用乙醚萃取并用旋转蒸发器浓缩。其用无水硫酸钠干燥，得到桉树叶挥发油。后，乳化剂制备和Tween-80和西潘-80以7:3的体积比均匀混合：3，并彻底在60℃下的HFB值（亲水亲油平衡的水浴中搅拌该混合乳化剂的浓度为12.0（水包油型乳化剂）。后，桉树叶和乳化剂的油以1:1的体积比混合：5，倒入砂浆，并在相同的方向（约1分钟），接着加入水完全研磨，粉碎并使用前过滤并灭菌。茎油叶提取物的提取物的制备。新鲜和油性叶子洗净，干燥，在搅拌机中取40g，加入蒸馏水2分钟，过滤得到含水提取物并灭菌。备鲤鱼的愈伤组织触发器。鲜油性愈伤组织生长20天（培养条件为B5 0.5 mg / L NAA 2.0 mg / L 6-BA 3.0％蔗糖 0.7％d将琼脂，pH5.8（25℃）置于研究中。心地研磨醪以获得油愈伤组织诱导物。
子悬浮液的制备内生菌YG42 YY26和接种到该板培养液中培养，并在28℃下持续4天，然后将板用无菌水洗涤以获得悬浮液的孢子的浓度和稀释至107细胞/ mL。备并混合标准8桉叶油素的检测，萜品烯-4-醇，α萜品醇，分别称量1，8-桉树，萜品烯-4-醇，α - 0.5克萜品醇，置于容量瓶用乙醇配制成浓度为10g / L的三种标准溶液。制备混合标准品，用超纯水将其稀释至0.01mg / L.将细胞发酵液和混合标准物分别注入自由空间并通过气相色谱（GC）检测。相色谱条件如下：HP-5毛细管柱（30 m×320μm×0.25μm），平衡温度95℃，平衡时间20min;载气：氮气，氢气流速为30 mL / min，空气流速为400 mL / min。氮气残留气体25 mL / min，空隙注入，3.0分配比。烘箱中的步骤如下：保持在90℃4分钟，然后再增加20℃/分钟至130℃，持续5分钟，然后20℃/分钟至190℃，持续1分钟，最后从20°C /分钟到240°C。物量的测定将细胞培养物用抽吸过滤，得到在烘箱中在45℃下干燥至恒重的细胞，并且质量被称为细胞干重。个孢子悬浮液用不同浓度的诱导子（液体紊乱牡蛎油，桉树叶水提取物和鲤鱼愈伤组织），其取样，并执行的加法诱导子在最佳培养条件下发酵后测试。物量积累和次级代谢物（1，8-桉树脑，萜品醇-4-醇，α-萜品醇与总挥发物），三个次级代谢的分析诱导子产物积累的影响。于标准品无法量化总挥发性物质，因此所有产品均表示为峰面积。度和稳定性测试使用的“1.5”的方法取10毫升0.01毫克/升的样品顶空瓶制备的混合标准样品，重复5次注射，计算1，8-桉油，松油最大RSD油-4-醇，α-萜品醇与总挥发物为1.62％，分别1.83％，1.71％和1.59％;相同的测试样品重复注射在同一天和RSD 1，8-桉树脑，γ萜品烯的5倍，α萜品醇的总挥发性物质分别为1.96％ ，3天，1.19％，1.38％和1.82％。恢复的测试需要由“1.5”中制备10g / L的标准溶液，并使用超纯水作为溶剂用于制备具有1.0，0.5和0各自的浓度混合的标准，将1mg / L和5ml置于自由空间中。瓶样品，按照“1.5”，以计算1，8-桉树脑，萜品烯-4-醇，α-松油醇，总挥发加入5毫升试验样品和测量的。高的物质区域的回收率分别为101.12％，分别为99.89％，99.47％和100.43％，相对标准偏差1.78％，1.92％，1.66％和1.44％。果与样品中的挥发性组分的分析在发酵液中的挥发性组分的鉴定的结果示于图1，我们可以在图1中看到，1，8-桉油醇的峰值时间，萜品烯-4-醇和α-萜品醇分别为2，840，5，157和5，325分钟。品（图1B）具有与标准相同的峰值时间（图1A），并被认为是与标准相同的材料。物质内生真菌的诱导子的效果在表1中给出的老茧油螨对生物质和YG42的启动子的效果，作为其浓度的增加，其效果逐渐增加。对照组相比，生物量增加了23.61％。茎叶水提物对内生细菌均无显着影响;榨油液的混浊液体诱导剂对内生细菌均有一定的抑制作用，随着浓度的增加，对内生细菌也有一定的抑制作用。
制逐渐加强。油性混浊水浓度为10.00％时，YY26和YG42的生物量分别为对照组的71.12％和70.53％。虫的茧活性对YY26的生物量有抑制作用，抑制作用随着浓度的增加而逐渐增加。浓度为10.00％时，YY26的生物量仅为对照组的31.10％。发真菌1.8桉叶油素内生菌的效果在表2中呈现的已知的是，螨虫的水性提取物对油1，8的积累促进作用两个内生菌的桉树。油提取物浓度为1.00％时，先增加后减少的趋势是YY26的1.8桉油的积累量最高，比对照组高11.80倍。度为2.50％时，YG42 1.8-eucalyptus油积累量最高，比对照组高7.73倍。的浊度和油的浊度具有促进和防止来自两种内生细菌的1.8-桉树油积累的作用。浓度为0.25％，油1.8桉树YY26和YG42区积累的最高量增加1.11和1.29倍相比于对照组。虫愈伤组织抑制了1，8-桉油在细胞内的积累，抑制效果随着浓度的增加而增加。钙矾石浓度为10.00％时，两种类型都在室内。1.8-桉树油的积累量最低，分别为对照组的45.12％和52.77％。发子的上内生真菌萜品烯-4-醇蘑菇在安徽农学在2017年表3中的效果表明，该油的含水提取物可以促进生产两种萜品烯-4-醇的内生菌。度为1.00％时，内生菌萜品烯-4-醇菌株的产量分别达到最大值8.32和5.86。
茧螨可诱导产生萜品烯-4-醇YY26内生菌的，但对生细菌的萜烯-4-醇YG42的累积影响不大。其浓度为1.00％时，内生细菌YY26松油烯-4-醇的积累达到最大值0.38。而，混浊含油水的混浊抑制了两种内生菌中萜品烯-4-醇的积累，浓度越高，抑制作用越强。的α-萜品醇内生真菌诱导子的效果在表4中给出的产油鲤鱼老茧的选举人对α萜品醇生产YY26内生菌和其浓度的增加促进作用。
效果是第一强和弱：当浓度为2.50％，在YY26内生真菌α萜品醇的积累达到其最大值（0.5）和α萜品醇的积累在YG42内生菌。乎没有效果。这两个内生细菌α萜品醇的积累最初青睐然后抑制油的含水提取物的浓度为用于YY26内生细菌1.00％。精积累最高，此时α-萜品醇的积累量为3.96。水提物浓度为0.50％时，内生真菌YG42中α-萜品醇的积累最高。时，α-萜品醇的累积量为1.30。类对水的浊度对两种内生菌中α-萜品醇的积累具有抑制作用。度越高，抑制越强。植物内生真菌总挥发物的诱导子的效果可在表5中可以看出，向其中三个激发子影响总挥发内生细菌的程度而变化。茧螨表明挥发性物质在YY26内生细菌的总积累的诱导，但对在植物内生菌YG42应变的总挥发物的积累没有显著效果，及效果随着注意力的增加，晋升很重要当浓度为10.00％时，促进作用最强，比对照组高13.26倍。生细菌YY26具有促进抑制后的效果总挥发性物质的积累：1.00浓度为最强时，它是1.00％，其为0.87倍高于对照组。YG42细菌中总挥发物的积累具有抑制作用，并且随着浓度增加，抑制作用更强。树油对两种内生菌中总挥发性物质的积累具有抑制作用。度越高，抑制越强，这与先前研究的结果基本一致。
论和讨论向发酵培养基中添加诱导子是提高次级代谢产物产量的常用方法。个实验的结果表明，桉树油电感油对原油产量的1.8桉树2个内生菌低浓度的诱导作用，但在抑制高浓度，考虑到石油。树油中含有大量的桉树油1.8和假设桉树油1.8的相关基因的两个内生真菌菌株的表达可以通过油造成的外源桉树1.8。一项规定。Expósito等[8]表明外源性紫杉醇激发子对紫杉醇相关基因的表达具有调节作用。高浓度下，桉树油具有在两个内生细菌的生长有一定的抑制作用，这可能是由于桉树油的轻微毒性[9-10];在高浓度下，桉树油适合两种类型。挥发性物质的积聚到细菌具有可以是由于油本身痰，其产生在填充有菌丝环境产生涡流效应的油的波动的抑制效果，所以挥发速度快于对照组，或者可能是内生菌将其转化为其他物质，需要进一步研究。鲤鱼脂肪的含水提取物对中的1，8-桉树，萜品烯-4-醇以及萜品烯2个内生菌油积累澄清促进效果，表明它可能是水提取物油它包含促进生产桉树油，1.8，其可以诱导有关的物质，如桉树-1.8的生物合成的基因的表达的物质。吸嗯[6]中的樱桃提取物的效果在杏链霉菌的内生菌菌株生产富伦菌素B的L.。WXC，可以确认，樱桃的提取物杏L.作为诱导剂以诱导生物合成基因B可以提高产率的富伦菌素B的活性化合物的表达，但具体机理有待进一步研究。茧螨对内生真菌YY26的生长具有抑制作用，但它促进了生产次级代谢产物的，这表明它是在不利条件下的次级代谢产物内生菌有益的。促进YG42的生长，这表明在角膜油螨某些物质能够抑制YY26的生长，并且它们中的一些可以提供必要的因素，以YG42的生长，从而促进生长YG42。次，粗代谢物的积累没有显着影响，可能是因为养分被用于细胞生长，并且没有表达1，8-桉等物质的基因。之，培养基中的营养物质对内生真菌中次生代谢物的积累具有更大的影响。间的含油水和提取油的愈伤组织诱导的各种影响，1，8-桉树油的生物合成受很多因素的影响，将水提取物含有流体细胞组织和其他油脂。生细菌产生的物质比油愈伤组织中含有的物质更丰富。此，在未来的研究中，我们应该加强营养素的优化，并尝试内生共培养的各种发酵方法。研究改善了内生真菌YY26和YG42的次生代谢产物的积累，为今后的工业化生产奠定了基础。考文献[1]卫YM，刘L，周XW，等人。生物合成途径紫杉醇的合成工程提高内生真菌紫杉酚生产者紫杉醇EFY21的产率（Ozonium属）[J]。African J Biotechnol Vol，2012，11（37）：9094-91。2] YANG YX，DONG XP，YAN YM et al。64- 67. [3] SONG Q，黄Y，羊H.，等人：由烟曲霉内生白车轴草[J] .nat PROD RES开发，2013年，25（1）产生的研究次级代谢产物的用于通过放线菌菌株对YJ1菌核病[J]，J AGRIC SCI，2012年，生产抗生素的发酵条件的优化4（7）：95 [4 RUIZSANCHEZĴFLORESBUSTAMANTE ZR，Dendooven L，和其它。144 -2150：紫杉醇生产发酵与黑孢属，从红豆杉藻[J] .J应用微生物，2010，109（6）分离的真菌的液体和固体状态的比较研究。[5]陈JH，JJ刘臧GG和其他真菌筛选内生紫杉醇生产和发酵条件的调控[J：J中南大学，2004年，35：65〜69 [6]吴昕提取物在其活性化合物的内生菌桃仁提取物的效果[J] .Biotechnology通报，2013（10）：93〜97。
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